免疫磁珠法分离人外周血CD4+CD25+调节性T细胞

目的 建立人外周血单个核细胞中CD4 CD25 调节性T细胞(regulatery T cells,Treg)免疫磁性细胞分离力(megnetic activated cell sorting,MACS),并鉴定其分离效率.方法 采用免疫磁珠两步法(即阴性分选和阳性分选2步)分离人周血单个核细胞中的CD4 CD25 调节性T细胞,首先采用生物素标记的鸡尾酒抗体和抗生物素标记的磁珠阴性分选CIM细胞,再用抗CD25 的磁珠阳性分选CD4 CD25 T细胞.分离后的细胞经抗体染色后再通过流式细胞仪检测其分离纯度;内因子染色检测其转录因子FOXV3的表达频率;台盼蓝染色检测细胞的存活率;3H-TdR掺入法检测其对CD4 CD25-T细脆殖抑制效应.结果 阴性分选CD4 T细胞的纯度为(92.2±1.7)%,阳性分选后CD4 CD25 Treg细胞的纯度(95.1±1.2)%.胞内因子染色FOXF3在CD4 CD25 Treg细胞中的表达率为(80.4±1.2)%,台盼蓝染色细胞存活率为(95.6±3.3)%.3H-TdR掺入法检测其对CIM CD25-T细胞具有明显的抑制作用.结论 采用免疫磁性细胞分离技术能够高效、快地得到一群纯度高并且细胞活力好的CD4 CIY25 Treg,为进一步研究其功能提供了方便.     

硫化氢对体外大鼠肝星状细胞内Ca2+浓度变化及细胞增殖的影响

目的 研究硫化氢(H₂ S)对大鼠肝星状细胞-T6(HSC-T6) Ca²⁺浓度、细胞增殖的影响及其机制。 方法 活化HSC-T6用含10%小牛血清DMEM培养液制备为1×10⁵个肝星状细胞(HSC)悬液。钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载细胞后，在不同刺激条件下，利用激光扫描共焦显微镜动态扫描HSC-T6细胞内Ca²⁺荧光强度（FI）变化，FI表示细胞内Ca²⁺浓度。四唑盐比色法，观察不同浓度H₂S供体——NaSH对HSC-T6细胞增殖的影响。 结果 低浓度H₂S（100μmol/L）明显降低HSC-T6细胞内Ca²⁺浓度（P<0.05)，而细胞增殖增加（增殖率为116%）；K_ATP通道阻断剂——格列本脲可阻断H2S的作用。高浓度H₂S（1mmol/L）刺激HSC-T6细胞内Ca₂₊浓度增加，但细胞增殖无明显变化(P＞0.05)。 结论 低浓度H₂S通过激活HSC-T6细胞K_ATP通道降低细胞内Ca²⁺浓度，可能通过调节细胞氧化应激促进细胞增殖；高浓度H2S刺激HSC-T6细胞内Ca₂₊浓度增加。提示H₂S在肝硬化门脉高压症的发生机制中具有双重作用。     

冠状动脉粥样硬化性心脏病细胞间黏附分子1基因 K469E多态性的研究

目的探讨细胞间黏附分子1(intercellularadhesionmolecule1,ICAM1)基因K469E多态性及其血浆水平与中国汉族冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)之间的关系。方法利用巢式PCR和免疫酶联吸附测定技术对160例冠心病患者和164名非冠心病对照进行ICAM1基因K469E多态性及其血浆水平的检测和对比分析。结果冠心病组K等位基因频率、ICAM1血浆水平均高于非冠心病对照组(P<0·05);含K等位基因的个体ICAM1血浆水平(344.34±128.59μg/L)高于不含K等位基因的个体(303·54±108·74μg/L),差异有统计学意义(P=0.008);且其患冠心病(心肌梗塞)的危险性升高(P=0.006,OR=2·158,95%CI:1.250~3.727);K等位基因与吸烟在影响冠心病发生危险性方面有协同作用。结论在中国汉族人群中存在ICAM1基因K469E多态性,其中K等位基因有可能是冠心病的遗传危险因素。     

IL-7对中国HIV/AIDS患者病程的影响

目的 了解IL-7对中国HIV／AIDS患者病程的影响。方法应用超敏感酶免法对66例中国HIV／AIDS感染者及8例健康对照者血浆IL-7水平进行定量检测，分析其与CD^＋T细胞绝对值、血浆病毒载量及HIV表型的相关性；并且在体外研究rhIL-7对人PBMC中T淋巴细胞增殖及CXCR4表达的影响。结果中国HIV／AIDS患者血浆IL-7水平高于健康对照（P〈0．05），与CD4^＋T细胞绝对值负相关（P〈0．01），与血浆病毒载量正相关（P〈0．05）。rhIL-7可在体外促进T淋巴细胞增殖反应及CXCR4表达。结论中国HIV／AIDS患者血浆IL-7水平升高，且与疾病进展密切相关，可作为疾病进展的相关标志之一。     

中国人群HLA-B等位基因与HIV-1感染者疾病进程相关性研究

目的：通过对中国人群HIV-1感染典型进展者（Typical progressors，TP）和长期不进展者（Long-term nonpmgressors，LTNP）HLA-B等位基因的分布频率的研究，探讨中国人群HLA-B等位基因与HIV-1感染者疾病进程的关系。方法：采用整群随机抽样方法从河南、吉林、辽宁、新疆、云南五省收集356例未经抗病毒治疗的HIV-1感染者血样，其中289例典型进展者和67例长期不进展者。应用聚合酶链反应-序列特异性引物技术（PCR-SSP）对其HLA-B等位基因特异性进行检测，并分析了他们的等位基因纯合子情况及Bw4／Bw6血清型，比较二组差异。结果：发现4个HLA-B等位基因位点在中国HIV-1感染人群中的表达频率较高，分别是HLA-B^＊13（TP：11．8％；LTNP：15．7％）、HLA-B^＊15（TP：17．3％；LTNP：8．2％）、HLA-B^＊40（TP：12．5％；LTNP：17．9％）、HIA-B^＊51（TP：9％；LTNP：10．4％）。其中长期不进展组HLA-B^＊67的等位基因频率为4．5％，典型进展组HLA-B^＊67的等位基因频率为1．2％，前者明显高于后者，具有显著性差异（P=0．022，OR=0．26，95％CI=0．08-0．89）。典型进展组的B^＊15的等位基因频率（17．3％）显著高于长期不进展组（8．2％）（P=0．009，OR=2．34，95％CI=1．18～4．76）。结论：HLA-B^＊67等位基因可能与延缓中国HIV-1感染者疾病进程相关，HLA-B^＊15等位基因可能与加速中国HIV-1感染者疾病进程相关。     

NG-硝基-L-精氨酸对大鼠内毒素性肺线粒体损伤的影响

目的： 观察非选择性一氧化氮合酶(NOS)抑制剂NG-硝基-L-精氨酸(L-NA)对急性肺损伤大鼠肺线粒体功能的影响，并探讨其改善急性肺损伤的作用机制。方法: 将SD大鼠随机分为空白对照组、急性肺损伤组、L-NA治疗组，采用舌静脉注射脂多糖(LPS)复制大鼠急性肺损伤模型，于大鼠急性肺损伤3h后给L-NA治疗3h，断头放血处死大鼠，迅速取出肺脏，匀浆器混匀后，低温差速离心法提取肺线粒体，测定线粒体总ATP酶、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总一氧化氮合酶（T-NOS）、诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、结构型一氧化氮合酶（cNOS）的活性，以及线粒体肿胀度、膜流动性和线粒体一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）含量；电镜观察大鼠肺线粒体超微结构的改变及治疗药对此改变的影响。结果: 在大鼠内毒素性急性肺损伤后，肺脏组织中线粒体表现为肿胀、膜流动性降低，线粒体中的T-NOS和iNOS活性显著升高，线粒体NO生成明显增加，而cNOS活性无明显变化；线粒体总ATP酶、SOD、GSH-Px活性均明显下降，线粒体MDA含量明显升高。急性肺损伤3h给予L-NA治疗3h,与急性肺损伤组相比，一氧化氮合酶活性有所改变，NO生成显著下降，总ATP酶、SOD、GSH-Px活性均显著升高，MDA含量下降。电镜结果显示内毒素性急性肺损伤后肺脏组织细胞水肿，线粒体肿胀、嵴断裂、溶解、消失；L-NA能改善内毒素性急性肺损伤引起的细胞水肿、线粒体肿胀和空泡化。结论: L-NA能明显抑制急性肺损伤后线粒体一氧化氮合酶活性，减少NO生成，改善线粒体能量供应，增加线粒体抗氧化作用，从而减轻急性肺损伤。     

心理干预对产妇产后抑郁及儿童心理发育影响的初步探讨

目的:探讨防治产后抑郁、促进儿童心理发育的方法和效果.方法:在围产期门诊按单、双号随机将首诊妊娠妇女分为实验组和对照组,对实验组216名孕妇进行系统心理保健,包括产前、产后集体心理卫生宣教、产后情绪监测、综合性心理治疗等心理干预措施,对对照组183名孕妇进行一般保健.分别采用Zung氏抑郁自评量表(SDS)定期监测两组妇女的情绪问题,用丹佛智能发育筛查表(DDST)监测两组儿童的智能发育,用Achenbach儿童行为量表(CBCL2～3岁家长用)评价儿童的行为发育.结果:实验组比对照组产妇产后不同时期的抑郁状态的发生率(x2=40.35～4.81,P均＜0.05～0.01)和抑郁症的患病率(3.7%/10.38%,x2=7,P＜0.01)均低,差异有显著性.两组儿童各年龄阶段DDST结果可疑和异常的发生率(x2=6.8～4.6,P＜0.05～0.01)差异显著.两组儿童2岁时行为问题发生率,经统计学检验均具有显著性差异(x2=16.3,P＜0.01),儿童行为部分因子分之间有显著差异(P＜0.05).结论:提示在儿童心理保健门诊对妇女进行有计划有目的的心理健康教育、情绪评定和及时的综合心理治疗,有利于防治产后抑郁及促进儿童心理发育.     

均匀材料和基于CT灰度值材料的股骨、胫骨有限元分析

为了定量分析骨量分布与载荷环境的关系,基于CT数据建立了大鼠股骨和胫骨的三维有限元模型,并分别赋予均匀的材料特性和基于CT灰度值的材料特性,用描述骨密度与力学刺激关系的算法来评估简单生理载荷下两种材料模型的有限元分析结果。结果表明,基于CT灰度值模型的有效应力和应变能密度分布与CT灰度分布比较相似,相关系数也较均匀材料模型更高;而且,基于CT灰度值模型的抗断裂能力更强;除此之外,这类模型也更符合骨再造平衡时的力学刺激均匀性假设。基于CT灰度值的有限元模型符合骨的功能适应性原理,可用于进行骨骼内部受力、变形和断裂分析,以及骨再造的数值仿真等研究。     

中国HIV感染长期不进展者相关免疫指标的研究

目的:研究中国HIV感染长期不进展者(Long-term nonprogressors,LTNP)相关免疫指标的变化。方法:采集284例未经抗HIV治疗的LTNP、典型进展的HIV感染者和AIDS病人及130例HIV抗体阴性健康人的抗凝全血,应用流式细胞仪分析技术对CD8+T淋巴细胞、NK细胞及DC细胞进行测定。结果:LTNPCD8+T淋巴细胞绝对值[(1104.51±511.81)个/μl]高于AIDS病人[(678.40±295.39)个/μl,P<0.05]。LTNPNK细胞的绝对值[(377.59±289.23)个/μl]显著高于HIV感染者[(292.49±445.87)个/μl]和AIDS病人[(153.62±110.36)个/μl,P<0.05]。LTNPCD123+DCs细胞绝对值[(6.76±3.74)个/μl]高于HIV感染者[(5.30±3.16)个/μl]和AIDS病人[(3.32±2.09)个/μl,P<0.05]。LTNPCD11c+DCs细胞绝对值[(21.73±11.92)个/μl]高于HIV感染者[(14.51±9.53)个/μl]和AIDS病人[(7.27±3.74)个/μl,P<0.05]。结论:LTNPCD8+T淋巴细胞、NK细胞和DC细胞高于典型进展的HIV感染者和AIDS病人,是延缓疾病进程的重要因素。     

HIV-1准种的变化与疾病进展关系的研究

目的　研究HIV 1准种的变化对疾病进展的影响。方法　PCR方法扩增HIV 1V3～V5区片段 ,采用HMA(异源双链泳动分析 )的方法分析 4 8例HIV/AIDS准种的变化 ,并结合HIV/AIDSCD4 T淋巴细胞计数及病毒载量的结果分析HIV 1准种的变化对疾病进程的影响。结果　在不同的疾病状态下 ,体内病毒变异是不相同的 ,在体内CD4 T淋巴细胞计数较高 ,血浆病毒载量低的个体内 ,病毒毒株有很强的变异特征 ,体内具有很高的准种复杂度 ;而在CD4 细胞数很低 ,病毒载量较高的个体 ,病毒基因变异较少 ,病毒准种较为单一。结论　HIV 1准种的变化与疾病进展相关。